بررسی میزان بیان ایزوفرم های a, h, d از ژن mitf در سلول های رنگدانه دار اپی تلیوم شبکیه انسان

چکیده از آنجا که محتوای ملانین در سلول های rpe افراد بالغ و نوزاد و همچنین بین پاساژهای مختلف سلولی در شرایط معمولی محیط کشت متفاوت می باشد در این مطالعه ژن های اصلی در مسیر سنتز ملانین، mitf-a، mitf-h، mitf-d و otx2 به عنوان فاکتورهای مهم رونویسی و تیروزیناز (tyr) و دوپاکروم تاتومراز (dct) به عنوان آنزیم های موثر در مسیر سنتز ملانین بررسی شدند. در ابتدا سلول های rpe از گلوب های چشم انسان های بالغ و نوزاد جدا شده و سپس در محیط dmem: f12 (1:1) حاوی%10 fbs کشت داده شدند. توسط آزمایش ایمونوسیتوشیمی (icc) بیان مارکر های rpe65 و cytokeratin 8/18 در سلول های جدا شده مورد تأیید قرار گرفت. بیان ژن های mitf-a، mitf-h، mitf-d ، otx2، tyr و dct در پاساژ های 7-1 سلول های rpe کشت داده شده با استفاده از روش real-time rt-pcr مورد ارزیابی قرار گرفت. با توجه به نتایج real-time rt-pcr بیان ژن های mitf-h، otx2، tyr و dct در سلول های rpe افراد نوزاد نسبت به افراد بالغ افزایش معنا داری را نشان داد همچنین با افزایش پاساژ سلول های rpe بیان ژن های mitf-h، otx2، tyr و dct کاهش معنا داری را نشان می داد. به نظر می رسد کاهش در بیان فاکتورهای رونویسی otx2 و mitf-h باعث کاهش در بیان ژن های tyr و dct می شود. با توجه به نقش آنزیم های تیروزیناز و دوپاکروم تاتومراز در فرآیند سنتز ملانین، می توان پیشنهاد نمود که کاهش بیان این ژن ها باعث کاهش سنتز ملانین در سلول های rpe می گردد.